鸡传染性支气管炎病毒(一)
鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infective bronchitis virus)鸡传染性支气管炎是鸡的一种急性、高度接触性呼吸道疾病。其主要表现为病鸡咳嗽、打喷嚏、气管罗音;青年鸡流鼻涕,产蛋母鸡产蛋量和质量下降;肾型病鸡肾脏肿胀、苍白,有大量尿酸盐沉积等。各年龄、性别、品种的鸡均易感,但主要感染1~4周龄青年鸡。鸡传染性支气管炎病毒(IBV)是冠状病毒科冠状病毒属的代表种。鸡传染性支气管炎于1931年在美国首次报道鸡传染性支气管炎病毒(一),1936年确定该病的病原为病毒,1937年成功在鸡胚中繁殖病毒。 禽传染性支气管炎现发生于美国、加拿大、英国、意大利、比利时、南斯拉夫、日本、印度等国,该病于1972年在广东首次发现,近年来已广泛流行。
��1.形态特征�ゼΥ�传染性支气管炎病毒颗粒略呈球形,直径约80~120nm,有时多形性。在鸡胚尿囊液制备的负染标本中,可见囊膜上有许多梨形纤维,呈放射状排列。纤维长约20nm,端呈球形,纤维间有较宽的空隙,这样的纤维易从病毒颗粒上脱落。将鸡胚尿囊液中的病毒置于4℃条件下18小时,负染常可见大量梨形纤维缺失。Bingham和Almeida(1977)观察了鸡传染性支气管炎病毒的内部结构,发现由RNA和蛋白质组成的螺旋状核衣壳,宽约9~16nm,呈烧瓶状或环状。��
2.基因组结构特征IBV基因组具有冠状病毒基因组的一般结构特征,Boursnell等(1987)测定了它的全序列,长27608nt(包括poly(A)尾),比迄今已知的其他RNA病毒都要大得多,且在5’和3’端有明显的同源性。5’端的20kb为单个基因,很可能转录翻译成RNA依赖性的RNA聚合酶。分析此20kb基因序列发现有两个开放阅读框(ORF),ORF1和ORF2。由负链RNA转录而来的6个mRNA具有相同的3’端,5’端的前导序列长约60nt。mRNA E、C和A分别编码病毒的三个主要结构蛋白S、M和N,这三个mRNA总长约8.7kb。 IBV基因组结构如图23-4所示。�23-4IBV基因组结构示意图——来自Boursnell��
3.血凝反应用1%胰蛋白酶(或乙醚)在37℃处理3小时的IBV,不能凝集红细胞,而鸡胚尿囊液中的病毒,用1%胰蛋白酶(或乙醚)在37℃处理3小时后,能凝集鸡红细胞。但IBV不含血凝素糖蛋白HE。一般认为,这是因为鸡胚尿囊液中存在一种能吸附病毒与红细胞表面的血凝素抑制物,使病毒不能吸附红细胞。用胰蛋白酶或乙醚处理后,这种抑制物被破坏,故能发生血凝反应。此反应是非特异性的,至今尚未证实特异性抗血清的血凝抑制作用。 但Cunningham(1966)用DEAE柱层析法从传染性病毒中分离出血凝素,其直径为60~70nm,此血凝素由51%蛋白质、34%脂质、少量糖和RNA组成。
4、干扰现象:传染性支气管炎病毒能干扰鸡、鸡胚及鸡胚肾细胞培养物中新城疫病毒的增殖,而鸡脑脊髓炎病毒则能干扰传染性支气管炎病毒在鸡胚中的增殖。有人认为,传染性支气管炎病毒对鸡毒支原体和鸡嗜血杆菌有协同作用。
5.理化特性:IBV粒子含单链RNA鸡传染性支气管炎病毒(一),对RNAse敏感。5.5.1.2脱氧尿苷不能抑制病毒增殖,由此证明其核心含的是RNA,不是DNA。IBV有14~16个多肽链,其中4个多肽链被糖基化。蔗糖漂浮密度为1.12~1.14g/cm3。对酒精、乙醚、氯仿、胆汁盐等脂溶剂敏感。用乙醚或吐温80破坏病毒粒子,不能像副粘病毒那样释放出核蛋白片段-核衣壳。不同病毒对温度的要求不同,如新分离的毒株在56℃下灭活15~30分钟,而适应鸡胚的毒株在此温度下可存活3小时以上。 在鸡胚尿囊液中添加20%马血清可提高病毒的热稳定性,水中病毒在室温下至少可存活24小时,1 mol/L氯化镁可提高病毒在50℃下的稳定性。病毒在低温下保存稳定,鸡胚尿囊液和细胞培养物中的病毒在-30℃至-60℃下可存活数月。冻干真空密封的病毒在低温下可存活长达24年,但在37℃下保存6个月则完全失活。含病毒的组织在50%甘油盐水中也能很好地保存。Dubose等报道鸡胚尿囊液病毒在pH 2和pH 12下,在室温下放置1小时仍有活性,但其他学者认为并不是所有的鸡传染性支气管炎病毒都具有这样的耐酸碱性。 病毒在pH7.8时最稳定。虽然认为传染性支气管炎病毒对乙醚敏感,但20%乙醚只能降低病毒滴度,而不能完全灭活。0.2%脱氧胆酸钠溶液室温作用10分钟,可完全灭活鸡胚尿囊液中的病毒。鸡传染性支气管炎病毒有抵抗胰蛋白酶的作用,每毫升含40mg胰蛋白酶的胰蛋白酶溶液在37℃作用1小时,对病毒的传染性无影响。1%煤酚、万分之一高锰酸钾、70%酒精、1%福尔马林,在室温下数分钟内即可杀死病毒。但1%石炭酸室温作用1小时,不能灭活病毒。
6、抗原性:美国报道的传染性支气管炎病毒有13个血清型,包括马萨诸塞、康涅狄格、霍尔特、格雷、JMK、爱荷华97、爱荷华609、特拉华2868、特拉华2897、SE17、克拉克333、佛罗里达和阿肯色99。Hopkin(1974)用固定量病毒与不同量血清的交叉中和试验犬传染性气管支气管炎犬传染性气管支气管炎,对19个空斑纯化株进行比较,结果显示,将其分为7个血清型,即马萨诸塞、康涅狄格(佛罗里达、克拉克333、爱荷华99)、佐治亚、SE17、特拉华(JMK、霍尔特、格伦)、爱荷华97、爱荷华609和新罕布什尔。另有第八个血清型,即澳大利亚T株。 有人认为鸡传染性支气管炎病毒只有两种主要血清型,即马萨诸塞型和康涅狄格型,其它可能是一些变种。引起鸡肾病的毒株主要有澳大利亚T株、霍尔蒂型、格伦型和马萨诸塞型,我国流行的毒株以马萨诸塞型为主。各血清型之间无或仅有部分交叉免疫,常给本病的诊断和防治带来一定的困难。用乙醚处理、氯化铯密度梯度离心法将病毒悬浮液分层,在免疫琼脂扩散试验中至少可检测到三种不同的可溶性抗原(免疫琼脂扩散板上有三条沉淀线):一种存在于病毒颗粒中,另两种分布在病毒表面。��